紫外-可见分光光度法常用测定成分
发布日期：2020-02-13 点击次数：
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一、蜂蜜中果糖的测定
果糖的测定法有高效液相色谱法、离子选择电极法、傅里叶变换近红外光谱法和分光光度法等，前三种方法的操作都较复杂，而分光光度法报道的方法中均加入显色剂，如间苯二酚、铁氰化钾等，这些物质对环境有污染。采用紫外-可见分光光度法测定果糖时，所加入的试剂仅为浓盐酸，减少了对环境的污染。
该方法的原理是：果糖在盐酸作用下生成羟甲基糠醛，在波长291nm 处有最大紫外吸收，果糖含量在0～30mg/L范围内服从比尔定律。
果糖标准液：称取0.1000g D-果糖（生化试剂）溶于二次蒸馏水中，并定容到1000mL，得0.1mg/mL 标准液。
样品处理：在具塞比色管中加入适量的0.1mg/mL 的果糖标准液，加入3mL 浓 HCl，用二次水定容至10mL，在沸水浴中加热8min，取出用流水冷却。
测定：称取蜂蜜0.1736g，定容至100mL。分别对标液和样液用1cm 比色皿在291nm 波长下，以试剂空白为参比，测定吸光度，从而计算果糖含量。
二、大豆总异黄酮含量的测定
大豆异黄酮是一类从大豆中分离提取的主要活性成分，具有异黄酮类化合物的典型结构。目前发现的大豆异黄酮共有12种，分为游离型的苷元和结合型的糖苷两类，主要活性成分为两种含量较高的苷元成分：金雀异黄素和大豆素。生物活性研究表明，大豆异黄酮特别是其中的金雀异黄素和大豆素，具有抗氧化、抗肿瘤、改善心血管、抗骨质疏松等功效。近年来，大豆异黄酮的生理活性已越来越引起社会和研究界的普遍重视，以大豆异黄酮作为食品添加剂的食品和制品在日本比较普遍，有些已走向欧美市场。国内关于大豆异黄酮的研究近些年来逐渐增多，出现了一些以大豆异黄酮为食品添加剂的食品及保健食品、保健药品。国外文献关于大豆异黄酮的含量测定多采用高效液相色谱法或气相色谱-质谱（GC-MS）联用方法。这两种方法需要较多种类的单体标准品，且操作不便。
为建立一种检测食物中大豆异黄酮含量的快速分析方法，张玉梅等（2000）以大豆中的活性成分金雀异黄素为标准品，在其紫外最大吸收峰259nm处测定大孔吸附树脂法配合溶剂法提取制得的大豆异黄酮试样的含量，大豆异黄酮试样中总异黄酮的含量以金雀异黄素计算为38.7%，平均加样回收率为99.86%，相对标准偏差为2.6%，方法简便，重现性好，可作为检测大豆异黄酮含量的一种手段。
三、食品中甜蜜素的测定
甜蜜素（环己基氨基磺酸钠）是一种新型的人工合成甜味剂，其甜度是蔗糖的30～40倍。我国于1986年正式批准在饮料、糕点、蜜饯中使用甜蜜素。近年对甜蜜素的毒理学研究发现其可能有致癌性及其代谢产物环己胺对心血管系统和睾丸有毒理作用，成为人们关注的焦点。为此，我国卫生部在《食品添加剂使用卫生标准》（GB 2760—2014）中明确规定了其使用范围及最大使用量。测定食品中甜蜜素的方法很多，国内外文献报道的方法有比色法、重量法、红外分光光度法、气相色谱法、薄层色谱法。这些方法的主要缺点是操作烦琐、费时，仪器条件要求高，不利于推广。与其他光谱分析方法相比，紫外-可见分光光度计的仪器设备和操作都比较简单，费用少，分析速度快，灵敏度高，选择性好，精确度与准确度好，用途广泛。
紫外-可见分光光度法测定甜蜜素的原理是：用乙酸乙酯在酸性条件下提取食品中的甜蜜素（环己基氨基磺酸钠），再以碱性水反提取，加入过量的次氯酸钠将甜蜜素转变为 N，N-二氯环己胺，溶于环己烷，在波长304nm 处测定。
标准工作曲线绘制：分别吸取甜蜜素标准溶液0.00mL、2.00mL、4.00mL、6.00mL、8.00mL、10.00mL于250mL分液漏斗中，各加入10%硫酸溶液100mL、乙酸乙酯80mL振摇，提取2min，弃水相。用30mL、20mL、20mL 0.1mol/L 氢氧化钠溶液振摇提取3次，每次1min，合并水相于另一250mL 分液漏斗中，往水相中加入环己烷10mL，振摇提取1min，弃去环己烷，加入10%硫酸溶液15mL、环己烷10.0mL、20g/L 次氯酸钠溶液5mL，振摇2mim，再加入20g/L 次氯酸钠溶液5mL，振摇2min，弃水相，先后用0.1mol/L NaOH 溶液、蒸馏水各50mL 洗涤环己烷层，经脱脂棉将环己烷层滤于10mL 比色管中，用环己烷作参比，于波长304mm 处测定吸光度。
样品测定：①液体食品和可溶于水的固体：称取相当于含甜蜜素6.0mg 的样品（如含CO2，先加热除去）于250mL分液漏斗中，以下与标准曲线方法相同。②不溶于水的固体：称取适量经磨碎的固体于100mL容量瓶中，加水至刻度，摇匀，浸泡1h以上，取相当于甜蜜素6.0mg 的滤液于250mL 分液漏斗中，以下同标准曲线方法。
四、食品中咖啡因的测定
目前，测定咖啡因的方法有电化学法、光谱法、气相色谱法、液相色谱法等。而用紫外-分光光度法进行咖啡因测定，只需加入几种试剂来消除干扰，它与美国分析化学家协会（Association of Official Analytical Chemists，AOAC）的分析方法比较，操作更简便、快速、准确。
该方法的测定原理为：可可类食品中除咖啡因外，还含有可可碱等成分，茶叶中还含有酚类、没食子酸和叶绿素等成分，这些成分均可溶于水，当用二氯甲烷作萃取剂时只有咖啡因被萃取，经多次萃取后在277nm 处测定吸光度，即可求咖啡因的含量。利用咖啡因与其他物质在有机溶剂中的溶解性能不同加以分离提取，然后根据咖啡因对紫外光有强烈吸收，在一定含量范围内与吸光度成正比。
样品处理：取适量样品（含 CO2 的样品应预先加热赶气，固体不溶性样品应加水置沸水浴1h，并不断搅拌），磨碎于三角瓶中，加沸水75mL 在沸水浴中加热45min，趁热过滤于容量瓶中，洗涤2～3次，冷却后定容，吸取溶液10mL 于50mL 容量瓶中，加5mL 0.01mol/L 的盐酸溶液和1mL碱性乙酸铅溶液去除茶叶中重金属离子，用蒸馏水定容。移取上述溶液30mL 于50mL 分液漏斗中，每次用5.0mL 二氯甲烷萃取（共7次），合并萃取液定容至刻度。
测定：从二氯甲烷为溶剂的咖啡因储备液（c=500μg/mL）中分别移取0.00mL、0.50mL、1.00mL、1.50mL、2.00mL、2.50mL、3.00mL、3.50mL 于50mL 容量瓶中，用二氯甲烷定容得系列标准液，在277nm处测定吸光度，同时将上述已处理好的样液在277nm 处测定吸光度，从工作曲线上即可求得茶叶中咖啡因的含量。
五、食品中硝酸盐的测定
用普通紫外分光光度法测硝酸盐与亚硝酸盐时，硝酸盐的最大吸收波长在203nm 左右，而亚硝酸盐的最大吸收波长在208nm 左右，两者的吸收光谱有很大部分重叠，给测定带来了一定的困难，而利用紫外-可见分光光度法可以有效避免这种现象的发生。
该方法的原理是：利用亚硝酸盐与盐酸间苯二胺发生重氮化偶联反应，生成环偶氮亚氨基化合物，在紫外区有选择性吸收而进行测定。
样品处理：称取约10.00g 经绞碎混匀的样品，置于打碎机中，加70mL 水和12mL 氢氧化钠溶液（20g/L）混匀，用氢氧化钠溶液（20g/L）调pH=8，转移至200mL 容量瓶中加10mL 硫酸锌溶液，混匀，如不产生白色沉淀再补加2～5mL NaOH 混匀。放置0.5h，用滤纸过滤，弃去初滤液20mL，收集滤液。
测定：吸取上述滤液10mL 于50mL 比色管中，用水稀释至刻度，另分别取0.00mL、0.20mL、0.50mL、1.00mL、2.00mL、3.00mL 亚硝酸钠标准使用液（5pg/mL），置于 50mL 比色管中，用水稀释至刻度，于样品管中分别加入10%盐酸间苯二胺溶液1mL 混匀，放置5min 后用1cm 的比色皿于波长 440nm 处测定吸光度。从标准工作曲线求得亚硝酸盐的含量。
六、谷氨酸钠含量的测定
谷氨酸钠（monosodium glutamate，MSG）是调味料的一种，俗称味精。谷氨酸钠的主要作用是增加食品的鲜味，在中国菜里用得较多，也可用于汤和调味汁。谷氨酸钠是指以粮食为原料经发酵提纯的结晶。我国自1965年以来已全部采用糖质或淀粉原料生产谷氨酸，然后经等电点结晶沉淀、离子交换或锌盐法精制等方法提取谷氨酸，再经脱色、脱铁、蒸发、结晶等工序制成谷氨酸钠结晶。
紫外-可见分光光度法测定谷氨酸钠的原理是：采用一阶导数法（有效扣除浑浊背景，吸收光谱曲线平坦的干扰物质）来测定谷氨酸的含量。
样品处理与测定：分别吸取50mg/mL 的谷氨酸钠标准溶液0.0mL、0.5mL、1.0mL、2.0mL、4.0mL、6.0mL、8.0mL、10.0mL 于10mL 比色管中，加纯水至刻度，用紫外-可见分光光度计进行扫描。
以纯水为参比，经一阶导数处理，于 230nm 处测得一阶导数值，以相应的浓度对其导数值作图，即得标准工作曲线。
称取1～2g 样品加水溶解并定容至 50mL，经一阶导数处理，于 230nm 处测其导数值，从标准工作曲线计算谷氨酸钠的含量。
七、发酵食品中黄曲霉毒素含量的测定
黄曲霉毒素（aflatoxins，AFT）系以发霉粮食为原料或曲种的发酵食品中产生的一种强致癌毒物。测定黄曲霉毒素含量的方法有许多种，由于仪器或试剂昂贵，使用很不经济，所以目前仍采用薄层法。该法虽有其优点，但操作复杂，技术要求高，重现性差。用紫外-分光光度法测定粮油和发酵食品中的黄曲霉毒素，准确可靠，具有灵敏、快速、经济的优点。
该方法的测定原理为水溶性样品经稀释后直接以氯仿提取，固体样品先用甲醇水-石油醚脱油提取，甲醇水提取液稀释后再以氯仿反提取。氯仿提取液脱水后进行微柱色谱，杂质被氧化铝吸附，黄曲霉毒素被硅镁吸附剂吸附。在波长为 365nm 的紫外光下有最大吸光值，呈蓝紫色荧光，吸光值与 AFT 的含量呈线性关系，以此作为定量测定。
八、食品中防腐剂苯甲酸的测定
国标 GB 5009.28—2016中关于食品防腐剂苯甲酸的测定方法有液相色谱法和气相色谱法，当采用乙醚提取碱滴定法和水蒸气蒸馏紫外分光光度法对食品中的防腐剂苯甲酸进行测定时，程序复杂且周期长，回收率也较低。而采用紫外-可见分光光度法对食品中的防腐剂苯甲酸进行测定时，可以大大缩短周期，简化程序。
该方法的原理是：结合乙醚提取碱滴定法与水蒸气蒸馏紫外分光光度法测定，采用乙醚萃取紫外分光光度法。该法简便快速。
样品处理：分别取0.05mg/mL 苯甲酸溶液0.5mL、1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.5mL 于125mL 分液漏斗中，加入20mL 饱和氯化钠溶液，10mL（1+1）HCl 溶液和25mL 乙醚。充分振荡5min，静置分层后弃去无机相，以试剂空白为参比，在223nm 测定其吸光度，求得工作曲线。
测定：准确称取样品10.0～15.0g 于250mL 容量瓶中，以水稀释至刻度。取上述溶液3mL于125mL分液漏斗中，操作如前，计算苯甲酸的含量。若样品为酱油，因其中含有一定量的酯类物质，需要进行氧化处理，称10.0～15.0g样品于250mL烧杯中，加入25mL的K2CrO3（04mol/L）溶液，7mL H2SO4（8mol/L）溶液。在水浴上加热30min，冷却，转移至250mL容量瓶中以水稀释至刻度，以下操作同前。
一、蜂蜜中果糖的测定
果糖的测定法有高效液相色谱法、离子选择电极法、傅里叶变换近红外光谱法和分光光度法等，前三种方法的操作都较复杂，而分光光度法报道的方法中均加入显色剂，如间苯二酚、铁氰化钾等，这些物质对环境有污染。采用紫外-可见分光光度法测定果糖时，所加入的试剂仅为浓盐酸，减少了对环境的污染。
该方法的原理是：果糖在盐酸作用下生成羟甲基糠醛，在波长291nm 处有最大紫外吸收，果糖含量在0～30mg/L范围内服从比尔定律。
果糖标准液：称取0.1000g D-果糖（生化试剂）溶于二次蒸馏水中，并定容到1000mL，得0.1mg/mL 标准液。
样品处理：在具塞比色管中加入适量的0.1mg/mL 的果糖标准液，加入3mL 浓 HCl，用二次水定容至10mL，在沸水浴中加热8min，取出用流水冷却。
测定：称取蜂蜜0.1736g，定容至100mL。分别对标液和样液用1cm 比色皿在291nm 波长下，以试剂空白为参比，测定吸光度，从而计算果糖含量。
二、大豆总异黄酮含量的测定
大豆异黄酮是一类从大豆中分离提取的主要活性成分，具有异黄酮类化合物的典型结构。目前发现的大豆异黄酮共有12种，分为游离型的苷元和结合型的糖苷两类，主要活性成分为两种含量较高的苷元成分：金雀异黄素和大豆素。生物活性研究表明，大豆异黄酮特别是其中的金雀异黄素和大豆素，具有抗氧化、抗肿瘤、改善心血管、抗骨质疏松等功效。近年来，大豆异黄酮的生理活性已越来越引起社会和研究界的普遍重视，以大豆异黄酮作为食品添加剂的食品和制品在日本比较普遍，有些已走向欧美市场。国内关于大豆异黄酮的研究近些年来逐渐增多，出现了一些以大豆异黄酮为食品添加剂的食品及保健食品、保健药品。国外文献关于大豆异黄酮的含量测定多采用高效液相色谱法或气相色谱-质谱（GC-MS）联用方法。这两种方法需要较多种类的单体标准品，且操作不便。
为建立一种检测食物中大豆异黄酮含量的快速分析方法，张玉梅等（2000）以大豆中的活性成分金雀异黄素为标准品，在其紫外最大吸收峰259nm处测定大孔吸附树脂法配合溶剂法提取制得的大豆异黄酮试样的含量，大豆异黄酮试样中总异黄酮的含量以金雀异黄素计算为38.7%，平均加样回收率为99.86%，相对标准偏差为2.6%，方法简便，重现性好，可作为检测大豆异黄酮含量的一种手段。
三、食品中甜蜜素的测定
甜蜜素（环己基氨基磺酸钠）是一种新型的人工合成甜味剂，其甜度是蔗糖的30～40倍。我国于1986年正式批准在饮料、糕点、蜜饯中使用甜蜜素。近年对甜蜜素的毒理学研究发现其可能有致癌性及其代谢产物环己胺对心血管系统和睾丸有毒理作用，成为人们关注的焦点。为此，我国卫生部在《食品添加剂使用卫生标准》（GB 2760—2014）中明确规定了其使用范围及最大使用量。测定食品中甜蜜素的方法很多，国内外文献报道的方法有比色法、重量法、红外分光光度法、气相色谱法、薄层色谱法。这些方法的主要缺点是操作烦琐、费时，仪器条件要求高，不利于推广。与其他光谱分析方法相比，紫外-可见分光光度计的仪器设备和操作都比较简单，费用少，分析速度快，灵敏度高，选择性好，精确度与准确度好，用途广泛。
紫外-可见分光光度法测定甜蜜素的原理是：用乙酸乙酯在酸性条件下提取食品中的甜蜜素（环己基氨基磺酸钠），再以碱性水反提取，加入过量的次氯酸钠将甜蜜素转变为 N，N-二氯环己胺，溶于环己烷，在波长304nm 处测定。
标准工作曲线绘制：分别吸取甜蜜素标准溶液0.00mL、2.00mL、4.00mL、6.00mL、8.00mL、10.00mL于250mL分液漏斗中，各加入10%硫酸溶液100mL、乙酸乙酯80mL振摇，提取2min，弃水相。用30mL、20mL、20mL 0.1mol/L 氢氧化钠溶液振摇提取3次，每次1min，合并水相于另一250mL 分液漏斗中，往水相中加入环己烷10mL，振摇提取1min，弃去环己烷，加入10%硫酸溶液15mL、环己烷10.0mL、20g/L 次氯酸钠溶液5mL，振摇2mim，再加入20g/L 次氯酸钠溶液5mL，振摇2min，弃水相，先后用0.1mol/L NaOH 溶液、蒸馏水各50mL 洗涤环己烷层，经脱脂棉将环己烷层滤于10mL 比色管中，用环己烷作参比，于波长304mm 处测定吸光度。
样品测定：①液体食品和可溶于水的固体：称取相当于含甜蜜素6.0mg 的样品（如含CO2，先加热除去）于250mL分液漏斗中，以下与标准曲线方法相同。②不溶于水的固体：称取适量经磨碎的固体于100mL容量瓶中，加水至刻度，摇匀，浸泡1h以上，取相当于甜蜜素6.0mg 的滤液于250mL 分液漏斗中，以下同标准曲线方法。
四、食品中咖啡因的测定
目前，测定咖啡因的方法有电化学法、光谱法、气相色谱法、液相色谱法等。而用紫外-分光光度法进行咖啡因测定，只需加入几种试剂来消除干扰，它与美国分析化学家协会（Association of Official Analytical Chemists，AOAC）的分析方法比较，操作更简便、快速、准确。
该方法的测定原理为：可可类食品中除咖啡因外，还含有可可碱等成分，茶叶中还含有酚类、没食子酸和叶绿素等成分，这些成分均可溶于水，当用二氯甲烷作萃取剂时只有咖啡因被萃取，经多次萃取后在277nm 处测定吸光度，即可求咖啡因的含量。利用咖啡因与其他物质在有机溶剂中的溶解性能不同加以分离提取，然后根据咖啡因对紫外光有强烈吸收，在一定含量范围内与吸光度成正比。
样品处理：取适量样品（含 CO2 的样品应预先加热赶气，固体不溶性样品应加水置沸水浴1h，并不断搅拌），磨碎于三角瓶中，加沸水75mL 在沸水浴中加热45min，趁热过滤于容量瓶中，洗涤2～3次，冷却后定容，吸取溶液10mL 于50mL 容量瓶中，加5mL 0.01mol/L 的盐酸溶液和1mL碱性乙酸铅溶液去除茶叶中重金属离子，用蒸馏水定容。移取上述溶液30mL 于50mL 分液漏斗中，每次用5.0mL 二氯甲烷萃取（共7次），合并萃取液定容至刻度。
测定：从二氯甲烷为溶剂的咖啡因储备液（c=500μg/mL）中分别移取0.00mL、0.50mL、1.00mL、1.50mL、2.00mL、2.50mL、3.00mL、3.50mL 于50mL 容量瓶中，用二氯甲烷定容得系列标准液，在277nm处测定吸光度，同时将上述已处理好的样液在277nm 处测定吸光度，从工作曲线上即可求得茶叶中咖啡因的含量。
五、食品中硝酸盐的测定
用普通紫外分光光度法测硝酸盐与亚硝酸盐时，硝酸盐的最大吸收波长在203nm 左右，而亚硝酸盐的最大吸收波长在208nm 左右，两者的吸收光谱有很大部分重叠，给测定带来了一定的困难，而利用紫外-可见分光光度法可以有效避免这种现象的发生。
该方法的原理是：利用亚硝酸盐与盐酸间苯二胺发生重氮化偶联反应，生成环偶氮亚氨基化合物，在紫外区有选择性吸收而进行测定。
样品处理：称取约10.00g 经绞碎混匀的样品，置于打碎机中，加70mL 水和12mL 氢氧化钠溶液（20g/L）混匀，用氢氧化钠溶液（20g/L）调pH=8，转移至200mL 容量瓶中加10mL 硫酸锌溶液，混匀，如不产生白色沉淀再补加2～5mL NaOH 混匀。放置0.5h，用滤纸过滤，弃去初滤液20mL，收集滤液。
测定：吸取上述滤液10mL 于50mL 比色管中，用水稀释至刻度，另分别取0.00mL、0.20mL、0.50mL、1.00mL、2.00mL、3.00mL 亚硝酸钠标准使用液（5pg/mL），置于 50mL 比色管中，用水稀释至刻度，于样品管中分别加入10%盐酸间苯二胺溶液1mL 混匀，放置5min 后用1cm 的比色皿于波长 440nm 处测定吸光度。从标准工作曲线求得亚硝酸盐的含量。
六、谷氨酸钠含量的测定
谷氨酸钠（monosodium glutamate，MSG）是调味料的一种，俗称味精。谷氨酸钠的主要作用是增加食品的鲜味，在中国菜里用得较多，也可用于汤和调味汁。谷氨酸钠是指以粮食为原料经发酵提纯的结晶。我国自1965年以来已全部采用糖质或淀粉原料生产谷氨酸，然后经等电点结晶沉淀、离子交换或锌盐法精制等方法提取谷氨酸，再经脱色、脱铁、蒸发、结晶等工序制成谷氨酸钠结晶。
紫外-可见分光光度法测定谷氨酸钠的原理是：采用一阶导数法（有效扣除浑浊背景，吸收光谱曲线平坦的干扰物质）来测定谷氨酸的含量。
样品处理与测定：分别吸取50mg/mL 的谷氨酸钠标准溶液0.0mL、0.5mL、1.0mL、2.0mL、4.0mL、6.0mL、8.0mL、10.0mL 于10mL 比色管中，加纯水至刻度，用紫外-可见分光光度计进行扫描。
以纯水为参比，经一阶导数处理，于 230nm 处测得一阶导数值，以相应的浓度对其导数值作图，即得标准工作曲线。
称取1～2g 样品加水溶解并定容至 50mL，经一阶导数处理，于 230nm 处测其导数值，从标准工作曲线计算谷氨酸钠的含量。
七、发酵食品中黄曲霉毒素含量的测定
黄曲霉毒素（aflatoxins，AFT）系以发霉粮食为原料或曲种的发酵食品中产生的一种强致癌毒物。测定黄曲霉毒素含量的方法有许多种，由于仪器或试剂昂贵，使用很不经济，所以目前仍采用薄层法。该法虽有其优点，但操作复杂，技术要求高，重现性差。用紫外-分光光度法测定粮油和发酵食品中的黄曲霉毒素，准确可靠，具有灵敏、快速、经济的优点。
该方法的测定原理为水溶性样品经稀释后直接以氯仿提取，固体样品先用甲醇水-石油醚脱油提取，甲醇水提取液稀释后再以氯仿反提取。氯仿提取液脱水后进行微柱色谱，杂质被氧化铝吸附，黄曲霉毒素被硅镁吸附剂吸附。在波长为 365nm 的紫外光下有最大吸光值，呈蓝紫色荧光，吸光值与 AFT 的含量呈线性关系，以此作为定量测定。
八、食品中防腐剂苯甲酸的测定
国标 GB 5009.28—2016中关于食品防腐剂苯甲酸的测定方法有液相色谱法和气相色谱法，当采用乙醚提取碱滴定法和水蒸气蒸馏紫外分光光度法对食品中的防腐剂苯甲酸进行测定时，程序复杂且周期长，回收率也较低。而采用紫外-可见分光光度法对食品中的防腐剂苯甲酸进行测定时，可以大大缩短周期，简化程序。
该方法的原理是：结合乙醚提取碱滴定法与水蒸气蒸馏紫外分光光度法测定，采用乙醚萃取紫外分光光度法。该法简便快速。
样品处理：分别取0.05mg/mL 苯甲酸溶液0.5mL、1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.5mL 于125mL 分液漏斗中，加入20mL 饱和氯化钠溶液，10mL（1+1）HCl 溶液和25mL 乙醚。充分振荡5min，静置分层后弃去无机相，以试剂空白为参比，在223nm 测定其吸光度，求得工作曲线。
测定：准确称取样品10.0～15.0g 于250mL 容量瓶中，以水稀释至刻度。取上述溶液3mL于125mL分液漏斗中，操作如前，计算苯甲酸的含量。若样品为酱油，因其中含有一定量的酯类物质，需要进行氧化处理，称10.0～15.0g样品于250mL烧杯中，加入25mL的K2CrO3（04mol/L）溶液，7mL H2SO4（8mol/L）溶液。在水浴上加热30min，冷却，转移至250mL容量瓶中以水稀释至刻度，以下操作同前。
